PCR技术是通过对基因的选择性片段进行体外高效扩增，实现目的基因的检测，该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针，巧妙地把核酸扩增（PCR）、杂交及光谱技术结合在一起，从而实现对目的基因的准确定量检测，正发展成为临床实验诊断的常规技术。其结果反映了标本中DNA或RNA存在的多少，结果通常用数字表示。报告为“copies/ml”,“IU/ml”,“copies”(copy即拷贝)，表示病原体基因组的个数，数据越大，病原体复制越厉害，传染性越强。

结合微生物实验室以及医院的实际情况，我科现开展：乙肝肝炎病毒（HBV）、丙肝肝炎病毒（HCV）、结核分支杆菌（TB）、沙眼衣原体（CT）、人乳头瘤病毒（HPV）、淋球菌病毒（NG）的PCR检测，随着PCR工作的开展以及临床工作的要求，我科会逐步完善其他各项感染性疾病病原学的分子水平检测。

“两对半”检测与HBV-DNA定量：

“两对半”是从免疫学水平检测HBV感染机体后引起的免疫应答，产生相应抗原抗体的含量，不能反映患者体内病毒的复制水平和传染程度。而PCR技术是从分子生物学水平直接检测HBV病毒的DNA，是病毒存在和复制最可靠的、最直接的指标。

HBV-DNA定量，临床上以<10³IU/ml为检测临界值，作为无复制或低水平复制指标，HBV-DNA>10⁵IU/ml，体内ALT水平异常，应考虑接受抗病毒治疗。

血清-用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入无菌干燥玻璃管。（推荐）

血浆-用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入含EDTA或枸橼酸钠抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混匀5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀。

HCV在体内呈低水平复制，病毒血症水平较低，不易诱导高水平的免疫应答。

HCV-RNA定量，临床上以<80IU/ml为检测临界值，作为无复制或低水平复制指标，HBV-RNA>10³IU/ml的患者应考虑接受抗病毒治疗。

血清-用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入无菌干燥玻璃管。（推荐）

血浆-用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血2ml，注入含EDTA或枸橼酸钠抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混匀5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀。

结核菌涂片检查灵敏性差，检出率只有30%，“金标准”细胞培养法，一般需要4-8w才能出结果，费时费力，延误诊断，而PCR方法能稳定检测10IU结核杆菌基因组DNA，灵敏度高，特异性强。以多次结核菌涂片检查阴性，临床上高度怀疑TB的患者检查TB-PCR为主。

痰液标本：清晨从肺深部咳出的痰液，用无菌管收集1~3ml，密闭送检。

肺及支气管灌洗液标本：用无菌管收集1~3ml，密闭送检。

尿液标本：用无菌管收集中段尿1~3ml，密闭送检。

其他体液：胸腹水、脑脊液等以无菌管收取1~3ml，密闭送检。

沙眼衣原体诊断多采用金标法或ELISA法检测相应抗体，但它实际检测人体对衣原体的免疫反应状态，免疫学检测有窗口期时间，而且不能判定是现症还是既往感染。而PCR能真实反映CT的存在和繁殖情况，更重要可提高标本中CT检测率，从理论上讲，只有有一个病原体存在PCR就可以检测到，临床治疗1-3月之后，再次检测可作疗效观察的指标。

男性分泌物标本：用细小棉拭子伸入尿道约2~4厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置于无菌管内，密闭送检。

女性生殖道标本：用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再用无菌棉拭子插入宫颈内，停5秒后旋动棉拭子采集置于无菌管内，密闭送检。

女性尿道标本：用无菌生理盐水棉球洗净尿道口，再用无菌棉拭子插入尿道2厘米，捻动拭子采集分泌物，置于无菌管内，密闭送检。

低危型HPV病毒是尖锐湿疣的主要致病菌，与我院皮肤性病门诊以及妇科门诊相关。

高危型HPV感染与宫颈癌关系密切，98%宫颈癌患者检出HPV，常规组织学与细胞学方法只能对临床和病理表现典型的病理做出诊断，其中80%的患者确诊已是宫颈癌晚期。PCR方法可以准确判断体内HPV感染，不仅可以对组织病理改变典型病理做出诊断，对不典型鳞状上皮细胞增生、亚临床和隐性HPV感染也能做出诊断。

HPV-DNA的美国FDA规定的妇女宫颈癌筛查的必查项目。

男性分泌物标本：取分泌物棉拭子或组织活检标本。如怀疑尿道湿疣可用细小棉拭子伸入尿道约2~4厘米，捻动拭子采集分泌物，将棉拭子置于无菌管内，密闭送检。

女性生殖道标本：用无菌生理盐水棉球洗去宫颈外分泌物，再用无菌棉拭子插入宫颈内，停5秒后旋动棉拭子采集置于无菌管内，密闭送检。

女性尿道标本：用无菌生理盐水棉球洗净尿道口，再用无菌棉拭子插入尿道2厘米，捻动拭子采集分泌物，置于无菌管内，密闭送检。

女性生殖道刮片标本：用刮片刮取宫颈病灶处脱落细胞，置入无菌玻璃管，密闭送检。

组织活检标本：取可疑组织适量置无菌玻璃管，密闭送检。